Resolución de subunidades de trombina como la enzima Agapurina del veneno de Agkistrodon halys y secuenciación de residuos de aminoácidos

[Resumen] Objetivo Determinar los 15 residuos de aminoácidos N-terminales de dos subunidades similares de Agacutin.Las dos subunidades de la molécula de enzima deben dividirse para obtener la cadena peptídica única de la subunidad y secuenciarse.Métodos Agacutin altamente purificado se obtuvo por método bioquímico.Se prepararon muestras de una sola subunidad para identificación y secuenciación mediante separación por electroforesis SDS-PAGE, recuperación de tiras adhesivas de subunidades y tecnología de electrotransferencia de membrana de PVDF.Este último determinó 15 residuos de aminoácidos en el extremo N-terminal de la subunidad mediante el método de degradación de Edman.Resultados La secuencia de la subunidad grande (16 kDa) fue DCSSGWSSYEEHQYY, y la de la subunidad pequeña (15 kDa) fue DSSGWSSYEGHEYYV.Conclusión Los resultados de la secuenciación mostraron que Agacutin era una nueva enzima similar a la trombina del veneno de serpiente al buscar en la base de datos del NCBI.